克糖丸作用的体外实验研究 

一、克糖丸对实验犬胰腺细胞胰岛素与C肽水平的影响
材料与方法
1.克糖丸溶剂对实验犬胰腺细胞胰岛素分泌水平的影响
药物：（1）克糖丸，复方天然药物丸剂，每瓶60g.提供单位：山东省章丘市第二人民医院张茂帅医师提供，成份同批准文号为：[济药管制]（2000）FZ014-58。以生理盐水稀释成溶剂,并浸泡24小时以上。以无菌的4层纱布过滤，收集滤液。放入40C备用。
细胞分离及培养：无菌条件下取出实验犬胰腺，以生理盐水漂洗后用小剪刀剪成细组织块。然后以150目筛网研磨成为单个细胞悬液。1000转离心2分钟，弃上清后，加入适量生理盐水，计数细胞并调细胞数至2×109/ml。以0.2 ml/孔加入48孔培养板中，再加入克糖丸滤液0.05ml、0.1ml或0.15ml三个浓度，定为实验1组、实验2组及实验3组，均加入0.1ml 克糖丸治疗的糖尿病鼠血清，放入CO2培养箱中，370C,5% CO2及饱和湿度下培养。不同天数取上清液进行胰岛素水平的检测。未加入血清的克糖丸溶剂作用组进行单独实验。
2.克糖丸溶剂对实验犬胰腺细胞C肽水平的影响
材料与方法
药物：（1）克糖丸，复方天然药物丸剂，每瓶60g.提供单位：山东省章丘市第二人民医院张茂帅医师提供，成份同批准文号为：[济药管制]（2000）FZ014-58。以生理盐水稀释成溶剂,并浸泡24小时以上。以无菌的4层纱布过滤，收集滤液。放入40C备用。
细胞分离及培养：无菌条件下取出实验犬胰腺，以生理盐水漂洗后用小剪刀剪成细组织块。然后以150目筛网研磨成为单个细胞悬液。1000转离心2分钟，弃上清后，加入适量生理盐水，计数细胞并调细胞数至2×109/ml。以0.2 ml/孔加入48孔培养板中，再加入克糖丸滤液0.05ml、0.1ml或0.15ml三个浓度，定为实验1组、实验2组及实验3组，均加入0.1ml 克糖丸治疗的糖尿病鼠血清，放入CO2培养箱中，370C,5% CO2及饱和湿度下培养。不同天数取上清液进行C肽水平的检测。未加入血清的克糖丸溶剂作用组进行单独实验。
结果
1.克糖丸溶剂对实验犬胰腺细胞胰岛素分泌水平的影响
首先对未加实验狗血清的实验犬胰腺细胞进行的体外实验表明，单独克糖丸溶剂作用前的平均胰岛素水平为226.8±25.2u/ml第二天为219.9±46.5u/ml，第三天为157.9±8.4u/ml，第五天为90.2±24.u/ml，第七天为80.6±19.4u/ml。呈现逐渐降低的变化趋势。提示该中药制剂的溶剂在体外并不能直接的刺激胰腺分泌胰岛素。

表11 克糖丸滤液对狗胰岛细胞体外分泌胰岛素水平的影响

由表11可见，该中药制剂的溶剂在体外并不能直接的刺激胰腺分泌胰岛素。
2.克糖丸溶剂对实验犬胰腺细胞C肽水平的影响
只加克糖丸溶剂而未加血清的实验组结果平均为：培养前上清0.8500 ng/ml，3天为0.7830 ng/ml，第5天为0.6139 ng/ml，第7天为0.5182 ng/ml。

表7 克糖丸滤液对实验犬胰岛细胞体外分泌C肽水平的影响（ng/ml）

由表7中显示，克糖丸滤液对实验犬胰岛细胞体外分泌C肽水平无明显影响

二、克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞胰岛素分泌与C肽水平的影响
材料与方法
1.克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞胰岛素分泌水平的影响
药物：（1）克糖丸，复方天然药物丸剂，每瓶60g.提供单位：山东省章丘市第二人民医院张茂帅医师提供，成份同批准文号为：[济药管制]（2000）FZ014-58。以生理盐水稀释成溶剂,并浸泡24小时以上。以无菌的4层纱布过滤，收集滤液。放入40C备用。
细胞分离及培养：无菌条件下取出实验犬肝脏，以生理盐水漂洗后用小剪刀剪成细组织块。然后以150目筛网研磨成为单个细胞悬液。1000转离心2分钟，弃上清后，加入适量生理盐水，计数细胞并调细胞数至2×109/ml。以0.2 ml/孔加入48孔培养板中，再加入克糖丸滤液0.05ml、0.1ml或0.15ml三个浓度，定为实验1组、实验2组及实验3组，放入CO2培养箱中，370C,5% CO2及饱和湿度下培养。不同天数取上清液进行胰岛素水平的检测。

2.糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞C肽分泌水平的影响
药物：
（1）克糖丸，复方天然药物丸剂，每瓶60g.提供单位：山东省章丘市第二人民医院张茂帅医师提供，成份同批准文号为：[济药管制]（2000）FZ014-58。以生理盐水稀释成溶剂,并浸泡24小时以上。以无菌的4层纱布过滤，收集滤液。放入40C备用。
细胞分离及培养：无菌条件下取出狗肝脏，以生理盐水漂洗后用小 剪刀剪成细组织块。然后以150目筛网研磨成为单个细胞悬液。1000转离心2分钟，弃上清后，加入适量生理盐水，计数细胞并调细胞数至2×109/ml。以0.2 ml/孔加入48孔培养板中，再加入克糖丸滤液0.05ml、0.1ml或0.15ml三个浓度，定为实验1组、实验2组及实验3组，放入CO2培养箱中，370C,5% CO2及饱和湿度下培养。不同天数取上清液进行胰岛素、C肽水平的检测。

结果
1.克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞胰岛素分泌水平的影响

表13 克糖丸滤液对实验犬肝脏细胞体外分泌胰岛素水平的影响

表13克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞胰岛素分泌水平待分析评价。

2.克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞体外分泌C肽水平的影响

表14 克糖丸滤液对实验犬肝脏细胞体外分泌C肽水平的影响

表14：克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞体外分泌C肽水平无明显的影响结果
三、克糖丸应用后体内对实验犬肝脏单位组织内胰岛素与C肽的水平影响：实验犬处死后，立即解剖取肝脏，研磨成单个细胞悬液，重量与体积比例为1g/2ml,冻于-200C，反复2次，离心后取上清液。测定胰岛素与C肽水平。
1.克糖丸溶剂对实验犬肝脏细胞胰岛素分泌水平的影响

克糖丸应用后体内对实验犬肝脏单位组织内胰岛素与C肽的水平影响

表 15克糖丸应用后体内对实验犬肝脏单位组织内胰岛素与C肽的水平

表15的结果初步表明克糖丸的体内应用，可以使单位重量内的实验犬肝脏组织内胰岛素水平升高。

评价：
在上述体内外实验结果证明克糖丸能够降低血糖，升高血清胰岛素水平，而不影响出现血清C肽降低的现象后，为了进一步明确其可能的机制，本实验对与血清胰岛素水平有关的组织进行了体外刺激实验。研究的结果初步说明，克糖丸溶剂在体外并不能明显的直接促进实验犬胰腺细胞分泌胰岛素和C肽。对实验犬肝脏细胞的刺激实验中，虽然在培养的第3天和第6天有上清胰岛素的升高现象，但是随着培养的延长，胰岛素水平很快降低。可能为肝脏细胞离体后为适应环境改变而产生的胰岛素或（类胰岛素物质）有关。至于C肽的变化，则在培养的第3天出现短暂升高现象，很快发生降低趋势。研究的结果初步表明克糖丸并不能直接刺激肝脏细胞分泌胰岛素和C肽。克糖丸可能经过其他生化引起肝细胞内的生化反应趋向于合成降糖物质的方向进行，进而引起了大量降糖物质的途释放有关。表15的结果初步表明克糖丸的体内应用，可以使单位重量内的实验犬肝脏组织内胰岛素水平升高。其中显示完全功切除组优于大部切除组及对照组；胰岛素水平与动物体内胰腺组织的数量成反比，即胰腺组织的数量去处越多，克糖丸使用后肝内胰岛素水平越高，这种现象目前用“胰腺是胰岛素产生的唯一脏器”及常规的生化理论还不能解释。肝脏是否可代胰腺产生胰岛素，尚需做出更多的实验加以证实。